Mirtilo, gênero Vaccinium, cv. Misty cultivado no Brasil : caracterização química e atividade citotóxica em células de mamíferos - Massarotto, Giovana (My University, 2015)
The blueberry is originally from southern United States which is, characterized by a temperate climate. It was subsequently introduced in Brazil in, 1980. Currently, Vacaria (RS) is the city with the largest fruit production in Brazil, this is mainly because of its geographic region of very cold weather in the mountains, in Campos de Cima da Serra. Blueberries are known to be rich in anthocyanins, a substance found in the skin of the fruit and is associated with significant antioxidant activity with cardiovascular risk reduction, anti-inflammatory activity and antitumor. Hydroalcoholic extracts of whole fruit and skin and pulp fractions of the fruit and the methanol extract of the whole fruit of fruits blueberry of the cultivar Misty were chemically characterized by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and high-resolution electrospray ionization mass spectrometry (ESI-HRMS) in negative mode. The chemical identification confirmed the presence of anthocyanins in samples of whole fruit and skin of methanolic and hydroalcoholic extracts, delphinidin, cyanidin, petunidin, malvidin being found, and polyphenolic compounds such as chlorogenic acid, quercetins, proanthocyanidins in the pulp of the hydroalcoholic extract and the whole fruit of the hydroalcoholic and the methanol extract. All the extracts analyzed showed lower cytotoxicity in non-tumor cell line (MRC-5) and selectivity to tumor cell lines (Hep-2, HeLa, HT-29), with less activity in the extract from the pulp in relation to the other samples analyzed. An important decrease in cell viability in tumor cell lines was observed when increasing time of exposure (from 24h to 72h) using methanol extract of the whole fruit. Induction of apoptosis was observed after 24h and 72h exposure to ethanol and methanol extract by ethidium bromide and acridine orange staining, where the majority of tumor lines showed increase in percentage at late apoptosis stages and necrosis. The results here observed suggests that the extract of blueberry, Misty cultivar, presents biological activity in tumor cell lines, but further studies are needed to understand the mechanisms involved in cytotoxicity and evaluate the effectiveness of these species as possible antitumor agent are necessary.
O mirtilo é um fruto originário da região sul dos Estados Unidos, caracterizada pela presença de clima temperado e foi introduzido no Brasil a partir dos anos 1980. Atualmente, Vacaria (RS) é a cidade com maior produção do fruto no Brasil, isso se dá principalmente pela localização geográfica montanhosa numa região de clima bastante frio, nos Campos de Cima da Serra. Os mirtilos são conhecidos por serem ricos em antocianinas, substância localizada na casca do fruto e que está associada à importante atividade antioxidante, com redução do risco cardiovascular, atividade anti-inflamatória e antitumoral. Neste estudo, buscou-se caracterizar quimicamente os extratos hidroalcóolicos obtidos do fruto inteiro e das frações da casca e polpa do fruto e do extrato metanólico do fruto inteiro de mirtilo da cultivar Misty, do grupo Southern Highbush por cromatografia líquida acoplada a espectrômetria de massas (GC-MS) com fonte de electrospray de alta resolução, acoplada a espectrômetro de massas (ESI-QTOF MS/MS) em modo negativo e positivo. A identificação química confirmou a presença de antocianinas nas amostras de casca e fruto inteiro dos extratos hidroalcóolico e metanólico, sendo encontrados derivados da delfinidina, cianidina, peonidina, petunidina e malvidina, além de compostos polifenólicos como ácido clorogênico, quercetinas, proantocianidinas na polpa do extrato hidroalcóolico e no fruto inteiro dos extratos hidroalcóolico e metanólico. Todos os extratos analisados apresentaram menor citotoxicidade na linhagem não tumoral (MRC-5) e seletividade para linhagens tumorais (Hep-2, HeLa, HT-29), sendo que verificou-se menor atividade no extrato obtido da polpa em relação as demais amostras. Observou-se uma redução importante na viabilidade celular em linhagens tumorais com aumento do tempo de exposição (de 24h para 72h) ao extrato metanólico do fruto inteiro. Indução de apoptose foi observada após 24h e 72h de exposição aos extratos hidrolcóolico e metanólico por coloração de laranja de acridina e brometo de etídio, em que a maioria das linhagens tumorais apresentaram-se em estágios finais do processo de apoptose e necrose. A partir desses resultados, sugere-se que o extrato de mirtilo da cultivar Misty possui atividade biológica em células tumorais, porém mais estudos são necessários com a finalidade de entender os mecanismos envolvidos na citotoxidade e comprovar a eficácia dessa espécie como possível agente antitumoral.
Keywords: Mirtilo; Apoptose; Biotecnologia; Blueberries; Apoptosis; Biotechnology