Determinação simultânea de esteviosídeo e rebaudiosídeo A em vinhos - Lazzari, Camila (My University, 2023)
According to the Brazilian legislation, in order to obtain medium dry and sweet wines, there is just allowed to add sucrose to the wine before bottling. The addition of any other natural or synthetic sweetener in wine is considered an adulteration and to ensure that these products are in accordance to the law, reliable analytical methods capable of detecting the use of these substances are needed. The natural stevioside and rebaudioside A sweeteners, mainly found in the leaves of Stevia rebaudiana (Bertoni), have been widely used by the food and beverage industry in recent years. Therefore, the objective of this work was to develop a method by high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (HPLC MS/MS) using electrospray ionization (ESI) source, for the determination of stevioside and rebaudioside A sweeteners in wines. The HPLC separation was carried out on a C18 column with gradient elution of 0.1% formic acid (v/v) in water and 0.1% formic acid (v/v) in acetonitrile as mobile phase. The ionization source worked in negative ion mode and data acquisition under MS/MS was achieved by applying multiple reaction monitoring (MRM). To confirm that analytical method is suitable for its intended use, several validation parameters, such as linearity, limits of detection (LOD), limits of quantification (LOQ), recovery (accuracy) and repeatability (precision) were evaluated. The correlation coefficients (R²) of the calibration curve were 0.9981 for stevioside and 0.9979 for rebaudioside A, revealed a good linearity in the concentration range for each sweetener. LOD and LOQ were 4.56 mg.L-1 and 4.80 mg.L-1 for stevioside, respectively. For rebaudioside A, the LOD and LOQ were 4.46 mg.L-1 and 4.70 mg.L-1, respectively. The recovery ranged were between 83.70% and 106.58% and the coefficient of variation were (menor ou igual) 3.48%, for both of the sweeteners studied. There were analyzed 24 national commercial wine and sparkling wine samples and the sweeteners were not detected in any of the them, implying that all the samples were conforming to the law. The proposed method has been successfully applied to the determination of stevioside and rebaudioside A in wines, demonstrating the importance of developing this work since there is no official method for detecting these natural sweeteners in wines. [resumo fornecido pelo autor]
Segundo a legislação do Brasil, a edulcoração de vinhos, a fim de se obter vinhos doces e demi-sec, pode ser realizada adicionando-se somente sacarose na bebida antes do engarrafamento. A adição de qualquer outra substância edulcorante, seja ela sintética ou natural, é considerada adulteração do vinho e para garantir que esses produtos estejam de acordo com a lei são necessários métodos analíticos confiáveis capazes de detectar o uso dessas substâncias. Os edulcorantes naturais esteviosídeo e rebaudiosídeo A, encontrados principalmente nas folhas da Stevia rebaudiana (Bertoni), têm sido bastante utilizados pela indústria de alimentos e bebidas nos últimos anos. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um método por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (CLAE-EM/EM), com fonte de ionização Eletrospray (ESI), para a determinação dos edulcorantes esteviosídeo e rebaudiosídeo A em vinhos. Para a separação cromatográfica utilizou-se uma coluna de fase reversa C18 com gradiente de eluição das fases móveis compostas por ácido fórmico 0,1% (v/v) em água e ácido fórmico 0,1% (v/v) em acetonitrila. A fonte de ionização operou em modo negativo e a aquisição de dados ocorreu no modo de monitoramento de reações múltipla (MRM). Para confirmar a adequação do método analítico, parâmetros de validação como linearidade, limite de detecção (LD), limite de quantificação (LQ), recuperação (exatidão) e repetibilidade (precisão) foram avaliados, na matriz. As curvas de calibração mostraram-se lineares com coeficientes de correlação (R²) de 0,9981 para o esteviosídeo e 0,9979 para o rebaudiosídeo A. Os LDs e LQs do esteviosídeo foram de 4,56 mg.L-1 e 4,80 mg.L-1 enquanto do rebaudiosídeo A foram de 4,46 mg.L-1 e 4,70 mg.L-1, respectivamente. Os dois edulcorantes apresentaram valores de recuperação dentro da faixa de 83,70 e 106,58% e os valores de coeficientes de variação obtidos foram (menor ou igual) 3,48%. Foram analisadas 24 amostras de vinhos e espumantes nacionais e não foram detectadas a presença dos edulcorantes analisados (os valores obtidos foram menores que o LQ), sugerindo que as bebidas analisadas não apresentam adulterações, estando de acordo com a legislação vigente no país. O método proposto apresentou-se eficaz para a determinação dos edulcorantes esteviosídeo e rebaudiosídeo A em vinhos, demonstrando a importância do desenvolvimento deste trabalho visto que atualmente não existe um método oficial de detecção desses edulcorantes naturais em vinhos. [resumo fornecido pelo autor]
Keywords: Vinho e vinificação; Bioteconologia; Cromatografia a líquido; Espectrometria de massa; Wine and wine making; Biotechnology; Liquid chromatography; Mass spectrometry