Acanthamoeba spp. em ambientes hospitalares e acadêmicos do Rio Grande do Sul
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Data
2014-06-17Orientador
Echeverrigaray, Sérgio
Delamare, Ana Paula Longaray
Metadata
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Protozoários do gênero Acanthamoeba estão entre os organismos de vida-livre mais abundantes sendo
encontrados em uma ampla gama de ambientes naturais como água, solo, poeira, vegetais, hospitais,
sistemas de ventilação e esgotos. Algumas espécies de Acanthamoeba são consideradas patógenos
oportunistas e têm sido associadas a infecções cutâneas, queratite, encefalite granulomatosa amebiana
(EGA) e a outras afecções em menor frequência. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a presença
de Acanthamoeba em áreas comunitárias de unidades acadêmicas e hospitalares, assim como
determinar o risco potencial dos isolados. Amostras foram coletadas em dois hospitais e duas
universidades do Rio Grande do Sul, Brasil. As amebas foram isoladas e caracterizadas utilizando
métodos morfológicos, fisiológicos e genéticos. Além disso, a variação e a especificidade de proteases
extracelulares foram determinadas por análise de zimogramas. A detecção e isolamento de amebas em
amostras clínicas e ambientais envolve a amostragem e cultura em meio ágar não nutriente. Apesar de
eficiente, este sistema requer diversas passagens visando eliminar contaminantes e não é apropriado
para o isolamento de amebas individuais de amostras biodiversas. Para solucionar este problema foi
desenvolvido um método alternativo que envolve amostragem, enriquecimento, indução de
encistamento e micromanipulação de cistos e cultura direta em placas de ágar não nutriente.
Utilizando os métodos convencional e alternativo, 429 amostras de áreas comunitárias de hospitais e
universidades foram avaliadas mostrando alta prevalência de Acanthamoeba tanto em ambientes secos
(13,77%) como úmidos (19,29%). A maior parte dos isolados (77,4%) foram classificados dentro do
grupo II, o qual inclui a maioria das espécies patogênicas. Os isolados apresentaram tolerância à
temperatura e pH, assim como resistência a desinfetantes, características que devem contribuir para a
sobrevivência e proliferação de Acanthamoeba em ambientes fechados, aumentado o risco de
contaminação das pessoas. Como as proteases extracelulares são consideradas um dos mais
importantes fatores de patogenicidade das amebas de vida-livre, dez isolados foram avaliados quanto à
atividade, padrão e especificidade de proteases. Análise com azocaseina mostrou variação significativa
na atividade proteolítica volumétrica e específica dos distintos isolados, independente do “status”
patogênico e não patogênico das espécies. Zimogramas em géis copolimerizados com gelatina
mostraram três padrões de bandas em isolados de
A. castellanii, e perfis particulares para as outras espécies. Todas as proteases secretadas por A.
castellanii, A. pearcei e A. healyi foram caracterizadas como serino proteases, enquanto apenas
cisteino e metaloproteases foram identificadas em A. astronyxis. Algumas proteases extracelulares
apresentaram importante atividade sobre gelatina, fibrinogênio e γ-globulina, e podem estar
implicadas na patogenicidade de Acanthamoeba e na resposta do hospedeiro.